一、产品概述
Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒为Annexin V与PI联合使用的试剂盒，用于检测细胞凋亡早期的发生，可区分凋亡早期凋亡细胞和晚期凋亡或坏死细胞。Annexin V为胞内蛋
白膜联蛋白家族成员，以钙离子依赖的方式选择性与磷脂酰丝氨酸(PS)结合。PS正常分布在细胞膜内侧。PS外翻到细胞膜外是不同类型的细胞在凋亡早期的明显特征，用带有FITC
标记的Annexin V，即Annexin V-FITC，可通过流式细胞仪或荧光显微镜检测到这一重要特征。FITC呈现黄绿色荧光。PI（Propidium Iodide, 碘化丙啶）是一种可对 DNA 染色的细
胞核染色试剂，在嵌入DNA 后释放红色荧光。PI不能穿透完整的细胞膜，但可以穿透坏死细胞或凋亡晚期丧失细胞膜完整性的细胞。Annexin V-FITC与PI联合使用时，PI 被排除在
活细胞（Annexin V-/PI-）和早期凋亡细胞（Annexin V+/PI-）外，而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被 FITC 和PI 结合染色呈现双阳性（Annexin V+/PI+）。
FITC最大吸收波长和激发波长分别为494nm和518 nm，PI-DNA复合物的最大吸收和发射波长分别为535 nm和617 nm。
二、核心优势
1. 高灵敏度：能够检测到早期凋亡的细胞，即使细胞凋亡比例较低也能准确识别，为细胞凋亡研究提供更详细的信息。
2. 特异性强：Annexin V FITC对PS的特异性结合以及PI对核酸的特异性染色，保证了检测结果的准确性，减少假阳性和假阴性的出现。
3. 操作简便：试剂盒内配备了齐全的试剂和详细的说明书，操作人员只需按照步骤进行操作，即可完成细胞凋亡的检测，节省时间和人力成本。
4. 应用广泛：适用于多种细胞类型的凋亡检测，包括悬浮细胞和贴壁细胞，可应用于生物医学研究、药物研发、细胞毒性检测等多个领域。
5. 结果直观：通过荧光信号的检测，能够直接在流式细胞仪或荧光显微镜下观察到凋亡细胞和坏死细胞的比例和分布情况，便于分析和统计。
四、使用方法
1. 细胞收集
对于悬浮细胞，直接将细胞悬液转移至离心管中，1000 1500 rpm离心5 10分钟，弃上清。
对于贴壁细胞，先用胰酶消化细胞，制成细胞悬液后，同悬浮细胞的处理方法进行离心弃上清。
用PBS洗涤细胞2次，每次1000 1500 rpm离心5 10分钟，弃上清。
2. 细胞重悬：加入100 μL Binding Buffer重悬细胞，使细胞浓度达到1×106/mL左右。
3. 染色
加入5 μL Annexin V FITC，轻轻混匀，避光室温孵育15分钟。
加入5 μL PI，轻轻混匀，避光室温孵育5分钟。
4. 检测准备：加入400 μL Binding Buffer，轻轻混匀后，立即用流式细胞仪或荧光显微镜进行检测。
五、注意事项
1. 样本处理
细胞收集过程中，操作要轻柔，避免过度吹打导致细胞损伤，影响检测结果。
贴壁细胞消化时，胰酶消化时间不宜过长，防止细胞过度消化而死亡。
2. 染色操作
染色过程需在避光条件下进行，以防止荧光染料淬灭，影响荧光信号的强度。
孵育时间要严格按照说明书进行，过长或过短的孵育时间都可能导致检测结果不准确。
3. 试剂保存
试剂盒应在2 8℃避光保存，避免反复冻融，以保证试剂的活性和稳定性。
试剂使用前需恢复至室温，但不宜长时间放置在室温下，使用后应及时放回冰箱保存。
4. 仪器检测
流式细胞仪或荧光显微镜在使用前需进行校准和调试，以确保检测结果的准确性。
检测过程中要注意仪器的参数设置，如荧光通道的选择、电压的调节等，避免出现信号过强或过弱的情况。
具体说明以说明书为准
