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大鼠Ⅰ型胶原交联羧基端肽（CTXⅠ）ELISA
简介
Ⅰ型胶原交联羧基端肽(CTXⅠ)，也被称为C端端肽，是纤维状胶原的C端端肽，如I型和II型胶原。CTX为细胞外基质中成熟的胶原纤维降解产物。它有多种形式，其中常用的 β-CTX 进入血液后不被降解，由肾脏直接排出，也被用作血清中的生物标志物，以测量骨的周转率。
检测原理
本试剂盒采用双抗体夹心法ELISA技术:将捕获抗体包被于酶标板上，捕获样品及标准品中的待测物CTXⅠ，清洗后，再加入生物素标记的检测抗体进行孵育后清洗，形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”免疫复合物，随后加入链霉亲和素偶联的辣根过氧化物酶进行孵育，待孵育结束后清洗，接着加入TMB显色后，若样本中有待测物则显蓝色，加入终止液停止反应。检测过程中游离的成分均被洗去，用酶标仪在450 nm处测OD值，颜色的深浅和样品中的待测物的含量呈正比，通过绘制标准曲线计算出样本中CTXⅠ的浓度。
示例数据
以下数据和曲线仅供参考，实验者需根据自己的实验数据建立标准曲线。
标准品浓度(ng/mL) | 10 | 5 | 2.5 | 1.25 | 0.625 | 0.3125 | 0.15625 | 0 |
OD值 | 2.605 | 1.807 | 1.063 | 0.658 | 0.425 | 0.26 | 0.127 | 0.051 |
校正OD值 | 2.554 | 1.756 | 1.012 | 0.607 | 0.374 | 0.209 | 0.076 | 0 |
本图所示标准曲线仅供示例，结果计算应以同次试验标准品所绘标准曲线为准计算样本结果。
重复性
板内变异系数小于10%，板间变异系数小于10%。
回收率
回收率在不同基质的整个测定范围内选取在健康大鼠血清、血浆和细胞培养上清中加入3个不同浓度水平计算回收率。
样本类型 | 范围（%） | 平均回收率（%） |
血清(n=8) | 86-102 | 94 |
血浆(n=8) | 90-106 | 98 |
细胞培养上清(n=8) | 94-110 | 102 |
灵敏度
经样本测试，本试剂盒的检测灵敏度为0.078125ng/mL。
线性关系
分别在选取的4份健康大鼠血清、血浆和细胞培养上清中加入高浓度CTXⅠ，在标准曲线动力学范围内进行稀释，评估线性。
稀释比例 | 回收率（%） | 血清 | 血浆 | 细胞培养上清 |
1:2 | 范围（%） | 92-96 | 90-98 | 92-112 |
1:4 | 范围（%） | 88-104 | 89-107 | 104-116 |
1:8 | 范围（%） | 95-102 | 92-101 | 99-115 |
特异性
该试剂盒测定可识别重组大鼠CTXⅠ。
其他相关蛋白在稀释缓冲液中制备为50ng/mL，并测定交叉反应性。没有观察到明显的交叉反应。