大鼠Ⅰ型胶原交联氨基端肽（NTXⅠ）ELISA

简介

N端端肽（NTX），也被称为氨基端胶原交联，是纤维状胶原的N端端肽，如I型和II型胶原。它被用作衡量骨质流失率的生物标志物。NTX可以在尿液（uNTX）或血清（NTX）中进行测量。Ⅰ型胶原交联氨基端肽（NTXⅠ）是骨胶原在肝脏中降解后尿中出现的一种稳定的最终产物，主要反映破骨细胞骨吸收活性，可灵敏地反映骨代谢的变化，是评价骨形态计量学骨吸收的重要参数，被认为是目前反映骨吸收状况最敏感、最特异的指标。

检测原理

本试剂盒采用双抗体夹心法ELISA技术:将捕获抗体包被于酶标板上，捕获样品及标准品中的待测物NTXⅠ，清洗后，再加入生物素标记的检测抗体进行孵育后清洗，形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”免疫复合物，随后加入链霉亲和素偶联的辣根过氧化物酶进行孵育，待孵育结束后清洗，接着加入TMB显色后，若样本中有待测物则显蓝色，加入终止液停止反应。检测过程中游离的成分均被洗去，用酶标仪在450 nm处测OD值，颜色的深浅和样品中的待测物的含量呈正比，通过绘制标准曲线计算出样本中NTXⅠ的浓度。

示例数据

以下数据和曲线仅供参考，实验者需根据自己的实验数据建立标准曲线。

本图所示标准曲线仅供示例，结果计算应以同次试验标准品所绘标准曲线为准计算样本结果。

重复性

板内变异系数小于10%，板间变异系数小于10%。

回收率

回收率在不同基质的整个测定范围内选取在健康大鼠血清、血浆和细胞培养上清中加入3个不同浓度水平计算回收率。

灵敏度

经样本测试，本试剂盒的检测灵敏度为1.56ng/mL。

线性关系

分别在选取的4份健康大鼠血清、血浆和细胞培养上清中加入高浓度NTXⅠ，在标准曲线动力学范围内进行稀释，评估线性。

特异性

该试剂盒测定可识别重组大鼠NTXⅠ。

其他相关蛋白在稀释缓冲液中制备为50ng/mL，并测定交叉反应性。没有观察到明显的交叉反应。