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大鼠Ⅰ型胶原α1（COL1α1）ELISA
简介
Ⅰ型胶原α1，也被称为α-1型胶原蛋白，是一种在由COL1A1基因编码的蛋白质。COL1A1编码的是I型胶原蛋白的主要成分，是大多数结缔组织（包括软骨）中的纤维状胶原蛋白。胶原蛋白是一种加强和支持身体许多组织的蛋白质。COL1A1基因产生I型胶原蛋白的一种成分，称为原α1（I）链。这条链与另一条原α1(I)链以及原α2(I)链结合，形成I型原生胶原蛋白的分子。这些三股绳状的原生胶原蛋白分子必须由细胞外的酶进行加工，一旦这些分子被加工，它们就会排列成长而细的纤维状，在细胞周围的空间中相互交联。交联的结果是形成非常强大的成熟I型胶原蛋白纤维。
检测原理
本试剂盒采用双抗体夹心法ELISA技术:将捕获抗体包被于酶标板上，捕获样品及标准品中的待测物COL1α1，清洗后，再加入生物素标记的检测抗体进行孵育后清洗，形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”免疫复合物，随后加入链霉亲和素偶联的辣根过氧化物酶进行孵育，待孵育结束后清洗，接着加入TMB显色后，若样本中有待测物则显蓝色，加入终止液停止反应。检测过程中游离的成分均被洗去，用酶标仪在450 nm处测OD值，颜色的深浅和样品中的待测物的含量呈正比，通过绘制标准曲线计算出样本中COL1α1的浓度。
示例数据
以下数据和曲线仅供参考，实验者需根据自己的实验数据建立标准曲线。
标准品浓度(ng/mL) | 20 | 10 | 5 | 2.5 | 1.25 | 0.625 | 0.3125 | 0 |
OD值 | 2.618 | 1.706 | 1.078 | 0.63 | 0.395 | 0.204 | 0.139 | 0.07 |
校正OD值 | 2.548 | 1.636 | 1.008 | 0.56 | 0.325 | 0.134 | 0.069 | 0 |
本图所示标准曲线仅供示例，结果计算应以同次试验标准品所绘标准曲线为准计算样本结果。
重复性
板内变异系数小于10%，板间变异系数小于10%。
回收率
回收率在不同基质的整个测定范围内选取在健康大鼠血清、血浆和细胞培养上清中加入3个不同浓度水平计算回收率。
样本类型 | 范围（%） | 平均均回收率（%） |
血清(n=8) | 86-102 | 94 |
血浆(n=8) | 90-106 | 98 |
细胞培养上清(n=8) | 94-110 | 102 |
灵敏度
经样本测试，本试剂盒的检测灵敏度为0.15625ng/mL。
线性关系
分别在选取的4份健康大鼠血清、血浆和细胞培养上清中加入高浓度COL1α1，在标准曲线动力学范围内进行稀释，评估线性。
稀释比例 | 回收率（%） | 血清 | 血浆 | 细胞培养上清 |
1:2 | 92-96 | 90-98 | 92-112 | |
1:4 | 范围（%） | 88-104 | 89-107 | 104-116 |
1:8 | 范围（%） | 95-102 | 92-101 | 99-115 |
特异性
该试剂盒测定可识别重组大鼠COL1α1。
其他相关蛋白在稀释缓冲液中制备为50ng/mL，并测定交叉反应性。没有观察到明显的交叉反应。