大鼠Ⅰ型胶原（COL1）ELISA

简介

Ⅰ型胶原α1，也被称为α-1型胶原蛋白，是一种在由COL1A1基因编码的蛋白质。COL1A1编码的是I型胶原蛋白的主要成分，是大多数结缔组织（包括软骨）中的纤维状胶原蛋白。胶原蛋白是一种加强和支持身体许多组织的蛋白质。COL1A1基因产生I型胶原蛋白的一种成分，称为原α1（I）链。这条链与另一条原α1(I)链以及原α2(I)链结合，形成I型原生胶原蛋白的分子。这些三股绳状的原生胶原蛋白分子必须由细胞外的酶进行加工，一旦这些分子被加工，它们就会排列成长而细的纤维状，在细胞周围的空间中相互交联。交联的结果是形成非常强大的成熟I型胶原蛋白纤维。

检测原理

本试剂盒采用双抗体夹心法ELISA技术:将捕获抗体包被于酶标板上，捕获样品及标准品中的待测物COL1，清洗后，再加入生物素标记的检测抗体进行孵育后清洗，形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”免疫复合物，随后加入链霉亲和素偶联的辣根过氧化物酶进行孵育，待孵育结束后清洗，接着加入TMB显色后，若样本中有待测物则显蓝色，加入终止液停止反应。检测过程中游离的成分均被洗去，用酶标仪在450 nm处测OD值，颜色的深浅和样品中的待测物的含量呈正比，通过绘制标准曲线计算出样本中COL1的浓度。

示例数据

以下数据和曲线仅供参考，实验者需根据自己的实验数据建立标准曲线。

本图所示标准曲线仅供示例，结果计算应以同次试验标准品所绘标准曲线为准计算样本结果。

重复性

板内变异系数小于10%，板间变异系数小于10%。

回收率

回收率在不同基质的整个测定范围内选取在健康大鼠血清、血浆和细胞培养上清中加入3个不同浓度水平计算回收率。

灵敏度

经样本测试，本试剂盒的检测灵敏度为3.91ng/mL。

线性关系

分别在选取的4份健康大鼠血清、血浆和细胞培养上清中加入高浓度COL1，在标准曲线动力学范围内进行稀释，评估线性。

特异性

该试剂盒测定可识别重组大鼠COL1。

其他相关蛋白在稀释缓冲液中制备为50ng/mL，并测定交叉反应性。没有观察到明显的交叉反应。