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大鼠Ⅰ型胶原α1(COL1α1)ELISA
Ⅰ型胶原α1，也被称为α-1型胶原蛋白，是一种在由COL1A1基因编码的蛋白质。COL1A1编码的是I型胶原蛋白的主要成分，是大多数结缔组织（包括软骨）中的纤维状胶原蛋白。胶原蛋白是一种加强和支持身体许多组织的蛋白质。COL1A1基因产生I型胶原蛋白的一种成分，称为原α1（I）链。这条链与另一条原α1(I)链以及原α2(I)链结合，形成I型原生胶原蛋白的分子。这些三股绳状的原生胶原蛋白分子必须由细胞外的酶进行加工，一旦这些分子被加工，它们就会排列成长而细的纤维状，在细胞周围的空间中相互交联。交联的结果是形成非常强大的成熟I型胶原蛋白纤维。
本试剂盒大鼠COL1α1免疫测定是一种三步法固相夹心ELISA，用于测量细胞培养上清液、血清和血浆中的大鼠COL1α1。试剂盒包含大肠杆菌表达重组大鼠COL1α1和针对重组蛋白产生的抗体。使用天然大鼠COL1α1获得的结果显示出与使用重组标准品获得的标准曲线平行的线性曲线。这些结果表明，该试剂盒可用于测定天然大鼠COL1α1的相对质量值。
检测原理
试剂盒采用双抗体夹心法ELISA技术：将捕获抗体包被于酶标板上，捕获样品及标准品中的待测物COL1α1，孵育清洗后，再加入生物素标记的检测抗体进行孵育后清洗，形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”免疫复合物，随后加入链霉亲和素偶联的辣根过氧化物酶进行孵育，待孵育结束后清洗，接着加入TMB显色液后，若样本中有待测物则显蓝色，则加入终止液停止反应。检测过程中游离的成分均被洗去，用酶标仪在450nm处测OD值，颜色的深浅和样品中的待测物的含量呈正比，通过绘制标准曲线计算出样本中COL1α1的浓度。
示例数据
以下数据和曲线仅供参考，实验者需根据自己的实验数据建立标准曲线。
标准品浓度(ng/mL) | 20 | 10 | 5 | 2.5 | 1.25 | 0.625 | 0.312 | 0 |
OD值 | 2.585 | 1.654 | 1.023 | 0.672 | 0.473 | 0.287 | 0.174 | 0.057 |
校正OD值 | 2.528 | 1.597 | 0.966 | 0.615 | 0.416 | 0.23 | 0.117 | 0 |
本图所示标准曲线仅供示例，结果计算应以同次试验标准品所绘标准曲线为准计算样本结果。
精密度
操作内精密度（测定中的精密度）在一块平板上对两个已知浓度的样品进行20次测试，以评估测定内精密性。
操作间精度（测定间精度）在10个单独的测定中测试两个已知浓度的样品，以评估测定间精度。至少有三名技术人员进行了实验。
操作内精密度 | 操作间精密度 | |||
样本 | 1 | 2 | 1 | 2 |
测定次数（n） | 20 | 20 | 10 | 10 |
平均值M（ng/mL） | 14.80 | 3.72 | 14.64 | 3.59 |
标准差SD | 1.23 | 0.24 | 1.17 | 0.23 |
变异系数CV（%） | 8.3% | 6.4% | 8.0% | 6.5% |
回收率
回收率在不同基质的整个测定范围内选取在健康大鼠血清、血浆和细胞培养上清中加入3个不同浓度水平计算回收率。
样本类型 | 范围（%） | 平均回收率（%） |
血清(n=8) | 86-102 | 94 |
血浆(n=8) | 90-106 | 98 |
细胞培养上清(n=8) | 94-110 | 102 |
灵敏度
线性关系
分别在选取的4份健康大鼠血清、血浆和细胞培养上清中加入高浓度COL1α1，在标准曲线动力学范围内进行稀释，评估线性。
稀释比例 | 回收率（%） | 血清 | 血浆 | 细胞培养上清 |
1:2 | 范围（%） | 82-96 | 90-98 | 92-112 |
1:4 | 范围（%） | 88-104 | 89-107 | 104-116 |
1:8 | 范围（%） | 85-102 | 92-101 | 99-115 |
特异性
该试剂盒测定可识别天然和重组大鼠COL1α1。
其他相关蛋白在稀释缓冲液中制备为50ng/mL，并测定交叉反应性。没有观察到明显的交叉反应。