大鼠Ⅰ型胶原吡啶交联终肽(ICTP)ELISA

简介   

I型胶原蛋白主要存在于骨骼中，占有机成分的90％。另外，在疏松结缔组织中也有I型胶原蛋白，与其它胶原蛋白如III型、V型和VI型并存。在这些部位中，I型胶原蛋白的所占比例也是**的。ICTP是I型胶原吡啶交联终肽，参与三价交叉联合，并在成熟的I型胶原蛋白的降解过程中释放出。血液中可以找到这种终肽的免疫生化完整形式，它似乎衍生于骨骼的重吸收和疏松结缔组织的降解。

本试剂盒大鼠ICTP免疫测定是一种三步法固相夹心ELISA，用于测量细胞培养上清液、血清和血浆中的大鼠ICTP。试剂盒包含大肠杆菌表达重组大鼠ICTP和针对重组蛋白产生的抗体。使用天然大鼠获得ICTP的结果显示出与使用重组标准品获得的标准曲线平行的线性曲线。这些结果表明，该试剂盒可用于测定天然大鼠ICTP的相对质量值。

检测原理

试剂盒采用双抗体夹心法ELISA技术：将捕获抗体包被于酶标板上，捕获样品及标准品中的待测物ICTP，孵育清洗后，再加入生物素标记的检测抗体进行孵育后清洗，形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”免疫复合物，随后加入链霉亲和素偶联的辣根过氧化物酶进行孵育，待孵育结束后清洗，接着加入TMB显色液后，若样本中有待测物则显蓝色，则加入终止液停止反应。检测过程中游离的成分均被洗去，用酶标仪在450nm处测OD值，颜色的深浅和样品中的待测物的含量呈正比，通过绘制标准曲线计算出样本中ICTP的浓度。

示例数据

以下数据和曲线仅供参考，实验者需根据自己的实验数据建立标准曲线。

本图所示标准曲线仅供示例，结果计算应以同次试验标准品所绘标准曲线为准计算样本结果。

精密度

操作内精密度（测定中的精密度）在一块平板上对两个已知浓度的样品进行20次测试，以评估测定内精密性。

操作间精度（测定间精度）在10个单独的测定中测试两个已知浓度的样品，以评估测定间精度。至少有三名技术人员进行了实验。

回收率

回收率在不同基质的整个测定范围内选取在健康大鼠血清、血浆和细胞培养上清中加入3个不同浓度水平计算回收率。

灵敏度

经样本测试，本试剂盒的检测灵敏度为0.08ng/mL。

线性关系

分别在选取的4份健康大鼠血清、血浆和细胞培养上清中加入高浓度ICTP，在标准曲线动力学范围内进行稀释，评估线性。

特异性

该试剂盒测定可识别天然和重组大鼠ICTP。

其他相关蛋白在稀释缓冲液中制备为50ng/mL，并测定交叉反应性。没有观察到明显的交叉反应。