18815064620
大鼠Ⅰ型胶原交联羧基端肽(CTXⅠ)ELISA
本试剂盒大鼠CTXⅠ免疫测定是一种三步法固相夹心ELISA，用于测量细胞培养上清液、血清和血浆中的大鼠CTXⅠ。试剂盒包含大肠杆菌表达重组大鼠CTXⅠ和针对重组蛋白产生的抗体。使用天然大鼠获得CTXⅠ的结果显示出与使用重组标准品获得的标准曲线平行的线性曲线。这些结果表明，该试剂盒可用于测定天然大鼠CTXⅠ的相对质量值。
检测原理
试剂盒采用双抗体夹心法ELISA技术：将捕获抗体包被于酶标板上，捕获样品及标准品中的待测物CTXⅠ，孵育清洗后，再加入生物素标记的检测抗体进行孵育后清洗，形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”免疫复合物，随后加入链霉亲和素偶联的辣根过氧化物酶进行孵育，待孵育结束后清洗，接着加入TMB显色液后，若样本中有待测物则显蓝色，则加入终止液停止反应。检测过程中游离的成分均被洗去，用酶标仪在450nm处测OD值，颜色的深浅和样品中的待测物的含量呈正比，通过绘制标准曲线计算出样本中CTXⅠ的浓度。
以下数据和曲线仅供参考，实验者需根据自己的实验数据建立标准曲线。
标准品浓度(ng/mL) | 10 | 5 | 2.5 | 1.25 | 0.625 | 0.313 | 0.156 | 0 |
OD值 | 2.512 | 1.753 | 1.022 | 0.611 | 0.505 | 0.273 | 0.175 | 0.057 |
校正OD值 | 2.455 | 1.696 | 0.965 | 0.554 | 0.448 | 0.216 | 0.118 | 0 |
本图所示标准曲线仅供示例，结果计算应以同次试验标准品所绘标准曲线为准计算样本结果。
精密度
操作内精密度（测定中的精密度）在一块平板上对两个已知浓度的样品进行20次测试，以评估测定内精密性。
操作间精度（测定间精度）在10个单独的测定中测试两个已知浓度的样品，以评估测定间精度。至少有三名技术人员进行了实验。
操作内精密度 | 操作间精密度 | |||
样本 | 1 | 2 | 1 | 2 |
测定次数（n） | 20 | 20 | 10 | 10 |
平均值M（ng/mL） | 7.20 | 1.70 | 7.31 | 1.65 |
标准差SD | 0.35 | 0.06 | 0.51 | 0.09 |
变异系数CV（%） | 4.8% | 3.6% | 7.0% | 5.3% |
回收率
回收率在不同基质的整个测定范围内选取在健康大鼠血清、血浆和细胞培养上清中加入3个不同浓度水平计算回收率。
样本类型 | 范围（%） | 平均回收率（%） |
血清(n=8) | 86-102 | 94 |
血浆(n=8) | 90-106 | 98 |
细胞培养上清(n=8) | 94-110 | 102 |
灵敏度
经样本测试，本试剂盒的检测灵敏度为0.08ng/mL。
线性关系
分别在选取的4份健康大鼠血清、血浆和细胞培养上清中加入高浓度CTXⅠ，在标准曲线动力学范围内进行稀释，评估线性。
稀释比例 | 回收率（%） | 血清 | 血浆 | 细胞培养上清 |
1:2 | 范围（%） | 82-96 | 90-98 | 92-112 |
1:4 | 范围（%） | 88-104 | 89-107 | 104-116 |
1:8 | 范围（%） | 85-102 | 92-101 | 99-115 |
该试剂盒测定可识别天然和重组大鼠CTXⅠ。
其他相关蛋白在稀释缓冲液中制备为50ng/mL，并测定交叉反应性。没有观察到明显的交叉反应。