人Ⅰ类主要组织相容性复合体G(MHCG) ELISA

简介    

Ⅰ类主要组织相容性复合体G，又称HLA-G组织相容性抗原，I类，G和人类白细胞抗原G（HLA-G），是一种由HLA-G基因编码的蛋白质。HLA-G属于HLA非经典I类重链准分子。这种I类分子是由一条重链和一条轻链（β-2微球蛋白）组成的异质二聚体。重链被固定在膜上。HLA-G在胎儿的胎盘细胞上表达。重链约为45kDa，其基因包含8个外显子。**外显子编码领导肽，第二和第三外显子编码α1和α2结构域，它们都与肽结合，第四外显子编码α3结构域，第五外显子编码跨膜区，第六外显子编码细胞质尾部。HLA-G可能在妊娠期的免疫耐受中起作用，在胎盘中被绒毛外滋养细胞（EVT）表达，而经典的MHC I类基因（HLA-A和HLA-B）却没有。HLA-G是NK细胞抑制性受体KIR2DL4的配体，因此滋养细胞表达这种HLA可以防御NK细胞介导的死亡。

本试剂盒人MHCG免疫测定是一种三步法固相夹心ELISA，用于测量细胞培养上清液、血清和血浆中的人MHCG。试剂盒包含大肠杆菌表达重组人MHCG和针对重组蛋白产生的抗体。使用天然人MHCG获得的结果显示出与使用重组标准品获得的标准曲线平行的线性曲线。这些结果表明，该试剂盒可用于测定天然人MHCG的相对质量值。

检测原理

试剂盒采用双抗体夹心法ELISA技术：将捕获抗体包被于酶标板上，捕获样品及标准品中的待测物MHCG，孵育清洗后，再加入生物素标记的检测抗体进行孵育后清洗，形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”免疫复合物，随后加入链霉亲和素偶联的辣根过氧化物酶进行孵育，待孵育结束后清洗，接着加入TMB显色液后，若样本中有待测物则显蓝色，则加入终止液停止反应。检测过程中游离的成分均被洗去，用酶标仪在450nm处测OD值，颜色的深浅和样品中的待测物的含量呈正比，通过绘制标准曲线计算出样本中MHCG的浓度。

示例数据

以下数据和曲线仅供参考，实验者需根据自己的实验数据建立标准曲线。

本图所示标准曲线仅供示例，结果计算应以同次试验标准品所绘标准曲线为准计算样本结果。

精密度

操作内精密度（测定中的精密度）在一块平板上对两个已知浓度的样品进行20次测试，以评估测定内精密性。

操作间精度（测定间精度）在10个单独的测定中测试两个已知浓度的样品，以评估测定间精度。至少有三名技术人员进行了实验。

回收率

回收率在不同基质的整个测定范围内选取在健康人血清、血浆和细胞培养上清中加入3个不同浓度水平计算回收率。

灵敏度

经样本测试，本试剂盒的检测灵敏度为0.19ng/mL

线性关系

分别在选取的4份健康人血清、血浆和细胞培养上清中加入高浓度MHCG，在标准曲线动力学范围内进行稀释，评估线性。

特异性

该试剂盒测定可识别天然和重组人MHCG。

其他相关蛋白在稀释缓冲液中制备为50ng/mL，并测定交叉反应性。没有观察到明显的交叉反应。