Easy Clone Kit Ⅰ

产品概述

本产品为便捷无缝克隆试剂盒。试剂盒中包含优化的2× Easy clone连接预混液、pUC19 control vector(linearized,Amp +) 及500 bp control insert。基于载体和PCR片段末端的同源序列完成单片段或多片段无缝克隆重组，阳性率可达95%以上，是一款便捷、快速、高效的克隆试剂盒。其中2× Easy clone连接预混液经优化后同时适用于平末端和粘性末端连接，5min即可完成单片段或15min完成多片段重组。

产品优势

便捷：5min可完成单片段克隆重组/15min可完成多片段克隆重组

高效：菌落数多，阳性克隆率可达95%以上

灵活：可随意选择目的片段插入位置

操作流程

重组克隆

1.根据实验需求提前制备线性化载体和插入目的片段。

2.按照载体和片段大小计算合适的加入量：

1)   Linearized Vector使用量可根据实际载体大小在50   ng- 200 ng 范围内进行调整，最适加入量计算方法如下：

克隆载体使用量 = [0.02×克隆载体碱基对数] ng

2)   单片段克隆的片段使用量推荐20 ng-200 ng，片段的最适加入量可根据以下方法计算：插入片段使用量 = [0.04×插入片段碱基对数] ng

3)   多片段克隆的片段使用量推荐10 ng-200 ng，片段的最适加入量可根据以下方法计算：各片段加入量 = [0.02×克隆载体碱基对数] ng

注：无论是单片段克隆或多片段克隆，当计算的最适加入量小于推荐的最小加入量时，直接按照推荐的最小加入量添加

于冰上配制反应体系：

用移液枪吹打混匀反应体系，50℃ 5   min进行重组。反应结束立即冰上冷却。

感受态细胞转化

1. 取出感受态细胞置于干冰上，待细胞融化后混匀细胞，10   µl重组产物中加入100   µl感受态细胞。冰上静置30   min。

2. 42℃ 45   sec进行转化，立即置于冰上冷却2-3   min。取900   µl LB培养基（不添加抗生素）置于15   ml离心管，加入完成转化的细胞混合液，37℃摇菌1   h(转速200–250   rpm)。

3. 5,000 rpm(2,400×g)离心5 min，弃去900   µl上清培养基，用余量培养基重悬剩余菌体。

4. 用无菌涂布棒在对应抗性培养基上涂布。

5. 37℃培养箱中倒置培养12-16   h。12-16   h后，平板上可见数个经重组反应的单克隆，挑取若干个克隆进行菌落PCR鉴定。